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2024微乐麻将插件安装开挂技巧教程
1、用户打开应用后不用登录就可以直接使用 ,点击微乐小程序挂所指区域
2、然后输入自己想要有的挂进行辅助开挂功能
3 、返回就可以看到效果了,微乐小程序辅助就可以开挂出去了
2024微乐麻将插件安装
1、一款绝对能够让你火爆辅助神器app,可以将微乐小程序插件进行任意的修改;
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3、微乐小程序辅助是可以任由你去攻略的,想要达到真实的效果可以换上自己的微乐小程序挂。
2024微乐麻将插件安装ai黑科技系统规律教程开挂技巧
1 、操作简单,容易上手;
2、效果必胜,一键必赢;
3、轻松取胜教程必备 ,快捷又方便
细菌基因组DNA的提取方法综述,提供了五种方法。
一 、快速微量提取法
A.取1.5ml菌体培养物于一灭菌Ep管中,12000rpm离心1min, 丢去上清夜 ,收集菌体 。
B.加入400ul裂解液(40mMTris-醋酸,20mM醋酸钠,1mMEDTA,1%SDS,pH7.8)混匀,置于37oC水浴1hr。
C.然后加入200ul5mol/L的氯化钠溶液,混匀后于13000rpm离心15min。
D.取上清液 ,用苯酚抽提2次,氯仿抽提1次 。
E.加两倍体积无水乙醇,1/10体积醋酸钾(3M ,pH8.0) ,-20度保存1小时后,13000rpm离心15min,弃上清液 ,沉淀用70%乙醇洗2次;置于室温干燥后,溶于50ulTE溶液中,置4℃保存备用。
二、蛋白酶/SDS法制备
先用10ml含适当抗生素的GBM过夜培养Delftia sp.,第二天4000rpm离心10min收集菌体 ,用Washing TE(50mmol/LTris-HCl pH8.0,10mmol/LEDTA pH8.0)洗菌体2次,之后将菌体充分悬浮在5ml 1×TE缓冲液中,先后加入0.5ml 5mg/L的蛋白酶、0.5ml 10% SDS ,轻轻混匀后50℃放置3h~5h,接着用等体积的Tris饱和苯酚抽提2次,苯酚/氯仿/异戊醇抽提一次 ,氯仿抽提一次后,乙醇沉淀DNA,用自动移液器吸管头将絮状DNA沉淀块吸附到Ep管中 ,70%乙醇洗2次,干燥后溶于适当1×TE或ddH2O中。
三 、
1) 细菌培养:细菌接种于5ml液体培养基中,37℃摇床(300rpm)培养过液 。
2) 细菌收集:取1ml培养物于1.5ml EP管中 ,室温8000rpm离心5min,弃上清,沉淀重新悬浮于1ml TE(pH8.0)中(用ddH2O也行)。
3) 菌体裂解:加入6μl 50mg/ml的溶菌酶,37℃作用2h。再加2mol/LNaCl50μl ,10%SDS 110μl,20mg/ml的蛋白酶K 3μl,50℃作用3h或37℃过夜 。(此时菌液应为透明粘稠液体)
4) 抽提:菌液均分到两个1.5ml EP管 ,加等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1),混匀,室温放置5-10min。12000rpm离心10min。抽提两次 。(上清很粘稠 ,吸取时应小心,最好枪头尖应剪去)
5) 沉淀:加0.6倍体积的异丙醇,混匀 ,室温放置10min。1 2000rpm离心10min。
6)洗涤:沉淀用75%的乙醇洗涤。
7) 抽(凉)干后,溶于50μl ddH2O中,取2-5μl电泳 。作PCR模板用。
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